T4 DNA Ligase T4原理載體及其他
T4 DNA Ligase 是從表達T4 DNA Ligase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導表后分離純化而來的。它催化相鄰DNA鏈的的5’-磷酸末端和3’羥基末端以磷酸二酯鍵結(jié)合反應(yīng)。該酶催化平滑末端或粘性末端DNA的連接，修復雙鏈DNA、RNA、DNA/RNA雜交中的單鏈中的單鏈切口。T4 DNA Ligase T4原理載體及其他
T4 DNA Ligase
T4 DNA Ligase T4原理載體及其他
目錄號：42017
試劑盒組成、包裝：
組成 | 50U(42017-50) | 100U(42017-100) | 300U(42017-300) |
T4 DNA ligase | 50U | 100U | 300U |
10 ′ Ligation Buffer | 40ml | 80ml | 120ml |
濃度： 5U/ml
儲運溫度：-20℃（保存6個月）
制品說明：T4 DNA Ligase 是從表達T4 DNA Ligase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導表后分離純化而來的。它催化相鄰DNA鏈的的5’-磷酸末端和3’羥基末端以磷酸二酯鍵結(jié)合反應(yīng)。該酶催化平滑末端或粘性末端DNA的連接，修復雙鏈DNA、RNA、DNA/RNA雜交中的單鏈中的單鏈切口。
適用范圍：（1）DNA片段和載體DNA快速連接；
（2）限制酶切片段的克?。?/span>
（3）將DNA片段與Linker或Adaptor連接。
酶貯存緩沖液：
20mM Tris-HCl (pH7.5)， 0.1 mM EDTA， 1mM DTT， 50 mM KCl， 50% glycerol。
10×Ligation Buffer：
400 mM Tris-HCl， 100 mM MgCl2， 100 mM DTT，5 mM ATP(PH7.8)，其他成分。
建議連接反應(yīng)體系： (以 10 μl 反應(yīng)體系為例)
標準反應(yīng)管 | 陽性對照管 | |
Vector | ml | ml |
PCR產(chǎn)物 | n ml ** | / |
對照插入DNA片段 | / | 1ml |
T4 DNA連接酶(5U/ml) | 2～5U | 2～5U |
10×Ligation Buffer | 1ml | 1ml |
加去離子水至終體積 | 10ml | 10ml |
反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置：
粘端連接：22oC反應(yīng)10分鐘(可根據(jù)需要延長到1小時)；也可以16oC反應(yīng)1-5小時。
平端連接：22oC反應(yīng)2小時或16 oC過夜。
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